常见问题-博福乐

A：关键控制点包括：1）严格去除细胞碎片和脂蛋白污染，建议用超速离心 + 过滤法双重纯化；2）避免 RNA 酶污染，全程使用无 RNA 酶耗材并添加抑制剂；3）低起始量优化，外泌体 RNA 总量极低，需使用专门的微量建库试剂盒；4）数据质控需关注 rRNA 残留率，外泌体中 rRNA 含量通常极低，若过高提示样本污染。

Q：外泌体给药时，如何确定合适的给药浓度和途径？不同给药方式的优缺点是什么？

A：给药浓度通常需根据外泌体的蛋白浓度或颗粒数进行换算，建议预实验设置梯度（如 1×10⁸-1×10¹⁰颗粒 / 只小鼠）。给药途径：尾静脉注射适用于全身循环研究；腹腔注射操作简便但吸收慢；局部注射（如肿瘤原位注射）靶向性好；鼻腔 / 肺部给药适合呼吸道疾病模型，不同途径的生物分布和代谢动力学差异较大，需结合研究目的选择。

Q：外泌体提取时，超速离心法和试剂盒法各有什么优缺点？该如何选择？

A：超速离心法：纯度高、成本低，但操作繁琐、耗时长，对设备要求高，且可能破坏外泌体结构；试剂盒法（如 PEG 沉淀法）操作简便、通量高，但纯度较低，易残留杂蛋白和脂蛋白。选择建议：追求高纯度做电镜 / 质谱分析选超速离心法；大样本量、做 WB/qPCR 或初筛实验可选试剂盒法。

Q：外泌体样本如何长期保存？不同保存条件对后续实验影响大吗？

A：短期保存（1-2 周）：4℃可稳定保存不超过 72 小时；长期保存建议分装后置于 - 80℃冰箱，避免反复冻融（每次冻融会导致约 10-30% 的外泌体破裂）。不同保存条件对实验影响显著：-20℃保存会导致外泌体聚集、蛋白降解，不推荐；添加 5-10% 甘油可提高冷冻稳定性，但可能影响后续电镜和 NTA 检测。

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