实验原理/Experimental principle
本产品基于Blue Native PAGE非变性电泳技术,用于分离10-10,000 kDa范围内的膜蛋白复合物及超分子复合物。
本产品采用温和去垢剂溶解蛋白复合物,考马斯亮蓝G-250与蛋白结合后使其带上负电荷并转化为水溶性,克服疏水性膜蛋白易聚集的问题。4-13%梯度凝胶设计:顶部4%孔隙较大适合超大复合物进入,底部13%孔隙较小提供更高分辨率。电泳后复合物呈蓝色条带,可直接观察或用于后续Western Blot、质谱分析等实验。
技术流程/Procedure
一、准备预制胶
将预制胶从4℃取出,撕掉底部胶条,缓慢垂直拔出梳子。
二、安装电泳槽
将预制胶装入兼容的电泳槽中,加入预冷的BN阴极缓冲液(蓝色,含0.02%考马斯亮蓝G-250)和阳极缓冲液(无色)。内槽加满阴极缓冲液,外槽加入阳极缓冲液。用注射器吹打加样孔,去除储存液。
三、上样
将制备好的样品加入加样孔中。预留一孔加入Native蛋白标准品。
四、电泳
连接电泳仪,4℃冷柜中进行电泳(或电泳槽置于冰浴中)。建议恒压电泳:先100 V电泳30分钟,待蓝色前沿进入分离胶后,将阴极缓冲液更换为不含考马斯亮蓝的BN阴极缓冲液(无色),再调至150-200 V继续电泳60-90分钟,直至蓝色前沿到达凝胶底部。
产品优势/Highlights
✪ 保持天然活性
无需蛋白变性,有效保持蛋白天然构象及复合物完整性;
✪ 宽范围分离
可同时分离高分子量蛋白复合物至中等分子量蛋白,适用范围广;
✪ 即用便捷
预制胶形式,即开即用,兼容主流电泳槽,节省时间。