实验原理/Experimental principle
本产品采用Bis-Tris缓冲体系,凝胶pH呈中性(6.4-7.0),相较传统Tris-Glycine系统(分离胶pH 8.8),可有效减少碱性条件下蛋白的降解、脱酰胺修饰或非特异性聚集,适用于磷酸化蛋白、膜蛋白等对pH敏感的样品,条带更清晰锐利,分辨率更高。
本产品采用4-12%连续浓度梯度的分离胶设计,在一块凝胶内实现从胶顶部(4%)到胶底部(12%)的浓度连续递增变化,从而使10-180 kDa范围内的宽分子量蛋白在同一块胶上获得良好分离。
技术流程/Procedure
一、准备预制胶
将预制胶从4℃取出,撕掉底部胶条,缓慢垂直拔出梳子。检查加样孔是否完整。
二、安装电泳槽
将预制胶装入兼容的电泳槽中(如Bio-Rad、天能、雅酶等)。加入Bis-Tris专用电泳缓冲液(MOPS或MES,推荐使用MOPS用于中高分子量蛋白,MES用于低分子量蛋白)。内槽缓冲液加满,外槽加至刻度线。用注射器或移液器吹打加样孔,去除储存液和气泡。
三、上样
将蛋白样品与上样缓冲液混合,加热变性后加入加样孔中。15孔预制胶最大上样量25 μL,建议上样量20-25 μL。使用SDS-PAGE上样缓冲液(含还原剂如DTT或β-巯基乙醇)。
四、电泳
盖上电泳槽上盖,连接电泳仪。建议恒压电泳:200 V恒压,电泳约25-30分钟,直至溴酚蓝指示剂到达凝胶底部。也可先80-100 V电泳10-15分钟,待样品进入分离胶后调至160 V继续电泳。
五、后续检测
电泳结束后取出凝胶,进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot转印检测。
产品优势/Highlights
✪ 宽范围分离
同时分离高分子量和小分子量蛋白,无需筛选多种固定浓度胶;
✪ 体系优化
有效减少碱性条件下蛋白降解或修饰,优于传统Tris-Gly体系;
✪ 即用便捷
预制胶形式,即开即用,兼容主流电泳槽,节省时间。