实验原理/Experimental principle
本产品基于Bis-Tris中性缓冲体系的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和免染蛋白成像技术。蛋白质在电场中通过凝胶的三维网状结构时,因其分子量大小不同而受到不同的筛分阻力,从而实现分离:分子量越大的蛋白迁移越慢,分子量越小的蛋白迁移越快。Bis-Tris体系(pH 6.4-7.0)相较于传统Tris-Glycine系统(pH 8.8),可有效减少碱性环境下蛋白的降解或修饰,条带更清晰。
本产品采用4-12%连续梯度凝胶设计,凝胶孔隙随浓度增加而减小:顶部4%孔隙较大适合大分子量蛋白,底部12%孔隙较小适合小分子量蛋白,可同时分离10-180 kDa范围内的宽分子量蛋白。凝胶中预加的免染成像底物在电泳后经紫外光照射1-5分钟,与蛋白质色氨酸残基共价交联并发射荧光,无需染色脱色即可直接成像,且不影响后续Western Blot检测。
技术流程/Procedure
将预制胶从4℃取出,撕掉底部胶条,缓慢垂直拔出梳子。检查加样孔是否完整。
将预制胶装入兼容的电泳槽中(如Bio-Rad、天能、雅酶等)。加入Bis-Tris专用电泳缓冲液(MOPS或MES,推荐使用MOPS用于中高分子量蛋白,MES用于低分子量蛋白)。内槽缓冲液加满,外槽加至刻度线。用注射器或移液器吹打加样孔,去除储存液和气泡。
将蛋白样品与上样缓冲液混合,加热变性后加入加样孔中。使用SDS-PAGE上样缓冲液(含还原剂如DTT或β-巯基乙醇)。
盖上电泳槽上盖,连接电泳仪。建议恒压电泳:200 V恒压,电泳约25-30分钟,直至溴酚蓝指示剂到达凝胶底部。也可先80-100 V电泳10-15分钟,待样品进入分离胶后调至160 V继续电泳。
电泳结束后取出凝胶,进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot转印检测。
产品优势/Highlights
✪ 宽范围分离
同时分离高分子量和小分子量蛋白,无需筛选多种固定浓度胶;
✪ 免染成像
凝胶含特殊荧光标记,紫外光照即可直接成像;
✪ 即用便捷
预制胶形式,即开即用,兼容主流电泳槽,节省时间。