实验原理/Experimental principle
本产品基于Tris-Acetate聚丙烯酰胺凝胶电泳系统，通过优化缓冲体系实现对超大分子量蛋白（40-500 kDa）的高分辨率分离。与常规Tris-Glycine-SDS-PAGE系统（推荐用于<200 kDa蛋白）相比，Tris-Acetate系统采用中性pH条件（凝胶缓冲液pH 7.0，电泳缓冲液pH约8.24），有效避免了碱性环境（常规系统分离胶pH 8.8）可能引起的蛋白降解、脱酰胺修饰或聚集，尤其适用于肌球蛋白、伴肌动蛋白等易降解或修饰的超大分子量蛋白。
在电泳过程中，凝胶缓冲液中的乙酸根离子（Acetate⁻）作为前导离子，电泳缓冲液中的Tricine⁻作为尾随离子，两者在电场中形成稳定的离子迁移体系。Tricine具有比常规甘氨酸更低的分子量和更好的缓冲能力，可更高效地拖拽超大分子量蛋白通过凝胶孔隙，避免蛋白在加样孔或浓缩胶中滞留。凝胶浓度可根据目标蛋白大小灵活配制，凝胶孔隙较大，便于大分子量蛋白顺利迁移。最终蛋白按分子量由大到小从上到下排列，条带清晰锐利，分辨率显著优于常规Tris-Glycine体系。本产品凝胶缓冲液不含SDS，既可用于变性电泳（电泳液中加入SDS），也可用于非变性电泳，适用于天然蛋白复合物的分析。
技术流程/Procedure
一、试剂准备
将40% Acr-Bis、10% APS、15× Gel Buffer、凝胶聚合催化剂、TEMED Substitute从冰箱取出，平衡至室温。
二、配制分离胶（以6%为例，一块1.0 mm mini胶）
在洁净小烧杯中依次加入：去离子水2.8 mL，15× Gel Buffer 0.67 mL，40% Acr-Bis 0.9 mL，10% APS 50 μL，TEMED Substitute 5 μL。混匀后注入制胶玻璃板中，液面高度距玻璃板上沿约1.5-2 cm。用去离子水或异丙醇液封，室温静置20-30分钟。
三、配制浓缩胶
待分离胶凝固后，倒去液封液体，用滤纸吸干残留水分。在烧杯中依次加入：去离子水1.4 mL，15× Gel Buffer 0.25 mL，40% Acr-Bis 0.2 mL，10% APS 20 μL，TEMED Substitute 2 μL。混匀后注入至玻璃板上沿，立即垂直插入梳子，避免梳齿下产生气泡。室温静置20-30分钟。
四、电泳
待凝胶完全凝固后，小心拔去梳子，将凝胶板装入电泳槽中。加入Tris-Acetate SDS电泳缓冲液（变性电泳）或非变性电泳液（非变性电泳）。点样后建议先以100 V恒压电泳约15分钟，再升至150-200 V恒压电泳约40-60分钟（根据溴酚蓝指示剂位置判断终点）。
五、后续检测
电泳结束后取出凝胶，进行考马斯亮蓝染色或Western Blot转印。转膜时建议将甲醇浓度降至5%或使用PVDF膜，以获得最佳转印效果。
产品优势/Highlights
✪ 专业分离
专为大分子量蛋白的高分辨分离设计，有效解决传统Tris-Glycine体系中聚集、沉淀、拖尾等问题；
✪ 灵活配制
提供凝胶配制全套试剂，可根据需要自行制备不同浓度凝胶，灵活适配；
✪ 天然保护
中性pH缓冲系统，避免碱性条件下蛋白降解或聚集，有效保持大分子量蛋白的完整性与天然状态。