实验原理/Experimental principle
本产品基于Tris-Tricine电泳缓冲系统和小分子量蛋白分离原理。在改良型促凝剂（替代传统TEMED）的催化下，丙烯酰胺单体与甲叉双丙烯酰胺发生自由基聚合反应，形成具有分子筛效应的三维网状结构。蛋白质在电场中通过凝胶孔隙时，因其分子量大小不同而受到不同的筛分阻力，从而实现分离：分子量越大的蛋白质迁移越慢，分子量越小的蛋白质迁移越快。
本产品采用Tricine替代常规SDS-PAGE体系中的甘氨酸作为尾随离子。常规Tris-Glycine-SDS-PAGE系统中，甘氨酸在电场中迁移时容易导致小分子量蛋白与SDS过度结合，造成条带弥散或分辨率下降。Tricine具有更低的pKa值和更好的缓冲能力，可在凝胶内形成更稳定的pH梯度，有效抑制SDS与小分子量蛋白的非特异性聚集，从而提高分辨率和条带清晰度。本产品采用两层凝胶系统设计：浓缩胶用于将蛋白样品压缩成窄带；分离胶采用高交联度配方，孔隙较小，对1-30 kDa范围内的小分子量蛋白及多肽具有极高的分辨率。电泳过程中，Tricine比甘氨酸迁移率更快，可高效拖拽小分子量蛋白通过高浓度凝胶，避免其在分离胶顶部堆积或卡顿，最终获得清晰锐利的蛋白条带。
技术流程/Procedure
一、试剂准备
将下层胶溶液、下层胶缓冲液、上层胶溶液、彩色上层胶缓冲液、改良型促凝剂从冰箱取出，平衡至室温。彩色上层胶缓冲液使用前请摇匀。
二、配制下层胶
取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液混匀（以一块1.0 mm厚度为例：各2.5 mL），加入50 μL改良型促凝剂，轻轻混匀后注入制胶玻璃板中，使液面高度距短玻璃板上沿约1.5 cm（或距梳齿下沿约0.5 cm）。
三、液封与凝固
沿玻璃板缓慢加入适量无水乙醇覆盖于下层胶之上，室温静置10-15分钟。当醇与胶之间出现清晰折射线时，表明下层胶已凝固。倒去上层液体，用滤纸吸干残留液体。
四、配制上层胶
取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液混匀（1.0 mm胶：各0.8 mL），加入16 μL改良型促凝剂，轻轻混匀后注入玻璃板中至满。
五、插入梳子
立即将梳子垂直插入上层胶中，避免梳齿下产生气泡。室温静置10-15分钟，待上层胶完全凝固。
六、电泳
小心拔去梳子，将凝胶板装入电泳槽中，加入电泳缓冲液，点样后按该条件电泳：10% Tricine 胶，120V，1 h； 16% Tricine 胶，120V，2 h。
产品优势/Highlights
✪ 专业分离
专为小分子量蛋白的高分辨分离设计，有效解决传统SDS-PAGE中模糊、弥散或无法分离的问题；
✪ 灵活配制
提供凝胶配制全套试剂，可根据需要自行制备不同浓度凝胶，灵活适配；
✪ 条带清晰
优化配方有效抑制小肽扩散，蛋白条带平整紧凑，分辨率高。