实验原理/Experimental principle
本产品基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子筛效应和梯度凝胶分离原理。在改良型促凝剂（替代传统TEMED）的催化下，丙烯酰胺单体与甲叉双丙烯酰胺发生自由基聚合反应，形成三维网状结构。蛋白质在电场中通过凝胶孔隙时，因其分子量大小不同而受到不同的筛分阻力，从而实现分离：分子量越大的蛋白质迁移越慢，分子量越小的蛋白质迁移越快。
技术流程/Procedure
一、试剂准备
将4-20%梯度胶溶液、浓缩胶溶液、促凝剂从冰箱取出，平衡至室温。
二、配制分离胶（4-20%梯度胶）
取适量4-20%梯度胶溶液（以一块1.0 mm厚度胶为例：约5 mL），加入梯度胶促凝剂50μL，迅速混匀。
三、灌制分离胶
将混合后的梯度胶溶液沿玻璃板缝隙缓慢注入制胶夹具中，液面高度距玻璃板上沿约1.5-2 cm（预留浓缩胶空间）。无需液封。
四、配制浓缩胶
取适量浓缩胶溶液（1.0 mm胶：约1-1.5 mL），加入浓缩胶促凝剂（通常10-15 μL），混匀。
五、灌制浓缩胶
将浓缩胶溶液沿玻璃板边缘缓慢注入至玻璃板上沿。立即垂直插入梳子，避免梳齿下产生气泡。
六、静置凝固
室温静置10分钟，待凝胶完全凝固（梯度胶和浓缩胶同步聚合）。
七、电泳
小心拔去梳子，将凝胶板装入电泳槽中，加入Tris-甘氨酸电泳缓冲液。点样后按常规条件电泳：建议恒压150-200 V，电泳时间约28-40分钟（根据溴酚蓝指示剂位置判断终点）。
八、后续检测
电泳结束后，取出凝胶进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot转印等检测。
产品优势/Highlights
✪ 宽范围分离
4-20%线性梯度凝胶设计，同时分离高分子量和小分子量蛋白；
✪ 快速制备
预混梯度配方，即取即用；
✪ 条带清晰
Tris-Gly缓冲体系优化，蛋白条带平整锐利，分辨率高。