实验原理/Experimental principle
本产品基于免染蛋白成像技术（Stain-Free Technology），将可与蛋白质中色氨酸残基特异性结合的三卤代化合物预混于凝胶配方中。在SDS-PAGE电泳结束后，将凝胶置于紫外光（推荐302 nm或310 nm）下照射数分钟，凝胶中的三卤代化合物与蛋白质色氨酸残基的吲哚基团发生共价交联反应，生成在紫外激发光下发射荧光的色氨酸衍生物。该荧光产物在紫外光激发下发出明亮的蓝绿色或橙黄色荧光，荧光强度与蛋白质浓度在一定范围内呈正比。
技术流程/Procedure
一、试剂准备
将下层胶缓冲液、上层胶缓冲液、改良型促凝剂从冰箱取出，平衡至室温。配制下层胶（8%）和上层胶（4%）。以一块1.0 mm厚度胶为例：下层胶(8%)：取等体积下层胶缓冲液和下层胶溶液（通常各2.5 mL），加入50 μL改良型促凝剂，混匀；上层胶(4%)：取等体积上层胶缓冲液和上层胶溶液（通常各0.8 mL），加入16 μL改良型促凝剂，混匀。促凝剂用量可根据室温微调（室温低时适当增加用量）。
二、灌制下层胶
将配制好的下层胶溶液用移液器或注射器沿玻璃板缝隙缓慢注入制胶夹具中，避免产生气泡。下层胶液面高度达到预定位置（根据梳齿长度预留上层胶空间，通常为距玻璃板上沿约1-1.5 cm）。随后，在上层胶液面上方缓慢加入适量无水乙醇进行液封，使凝胶界面平整。
三、下层胶凝固
室温静置10-15分钟，直至下层胶与液封界面之间出现清晰的折射线，表明凝胶已聚合完全。倒掉水封层，用滤纸条吸干残留液体。
四、灌制上层胶
将配制好的上层胶溶液沿玻璃板边缘缓慢注入至玻璃板上沿，避免产生气泡。立即将梳子垂直插入上层胶中（注意避免梳齿下气泡残留）。室温静置10-15分钟，待上层胶完全凝固。
五、电泳
待凝胶完全凝固后，小心拔去梳子，将凝胶板装入电泳槽中，加入电泳缓冲液（推荐Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液或配套缓冲液）。点样孔用缓冲液冲洗后上样。规定电压条件下进行电泳（150-200V），直至溴酚蓝指示剂到达凝胶底部。
六、免染成像
电泳结束后，取出凝胶，置于荧光凝胶成像仪中。选择免染蛋白成像模式（推荐302 nm或310 nm紫外透射光源），照射激发2-5分钟（具体时间依据仪器说明书优化）。在相应发射波长通道（约520-550 nm）下采集图像，蛋白条带呈现明亮荧光，可直接观察和分析，无需染色脱色。
产品优势/Highlights
✪ 免染成像
凝胶含特殊荧光标记，电泳后紫外光照即可直接成像；
✪ 快速制备
预混配方设计，无需计算各组分添加量，即取即用；
✪ 专业分离
8%低浓度分离胶，专为较大分子量蛋白的高效分离检测设计。