实验原理/Experimental principle
本产品基于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）中蛋白质在保持天然构象和生物活性的条件下按分子量大小及电荷密度分离的基本原理。与SDS-PAGE不同，Native-PAGE体系中不含SDS和还原剂，蛋白质保持其天然构象、亚基组装状态及等电点，电泳迁移率取决于蛋白质的分子量、形状及自身净电荷。本产品以Hepes（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）作为缓冲体系的核心成分，Hepes具有优异的pH缓冲能力（工作范围pH 6.8-8.2），可有效维持电泳过程中缓冲液pH的稳定，减少产热，最大程度保护蛋白质的天然结构和生物活性。
技术流程/Procedure
一、配制1×工作液
取适量20×浓缩缓冲液，用去离子水按1:20比例稀释（例如：50 mL浓缩液 + 950 mL去离子水），搅拌均匀即可使用。注意：Native-PAGE缓冲液不含SDS，稀释后无需添加其他成分。若浓缩液出现沉淀，可于37℃水浴加热溶解后再行稀释。
二、安装电泳装置
将配制好的1×电泳缓冲液倒入垂直电泳槽的内槽和外槽，内槽缓冲液需完全覆盖加样孔，外槽液面应高于内槽底部电极。确认装置无漏液后，小心拔出凝胶梳子。（注意：Hepes体系阳极和阴极使用相同缓冲液，无需区分）
三、上样
将制备好的非变性蛋白样品（注意：样品缓冲液中不含SDS和还原剂，且未经加热变性）及Native Marker加入凝胶加样孔中，根据加样孔容量通常上样10-30 μL。注意避免移液器尖端刺破凝胶或其他加样孔。上样前无需加热变性，室温或冰上保存即可。
四、电泳
盖好电泳槽上盖，连接电泳仪电源。建议电泳条件：恒压100-150V（非变性电泳电压不宜过高），将电泳槽置于冰浴中进行，以保持蛋白天然构象和活性。总电泳时间约60-120分钟，待指示染料到达凝胶底部时结束电泳。注意：Native-PAGE电泳速度较SDS-PAGE慢，应避免电压过高导致产热和蛋白变性。
五、后续检测
电泳结束后关闭电源，取出凝胶，切除浓缩胶。根据实验目的进行考马斯亮蓝染色（可检测蛋白复合物）、酶活性染色（保持蛋白天然活性）或Western Blot印迹检测（需使用Native-PAGE友好的转膜条件）。注意：非变性条件下蛋白质的转膜效率可能低于变性条件，建议优化转膜缓冲液（如加入少量SDS）。
产品优势/Highlights
✪ 保持天然活性
Hepes中性pH缓冲体系，全程无变性剂，有效保持蛋白天然构象、酶活性及蛋白复合物完整性；
✪ 高倍浓缩
20×浓缩液设计，使用时按1:19比例稀释，单瓶处理量大，经济实用，节省储存空间；
✪ 条带清晰
Hepes体系有效减少离子不均匀现象，蛋白条带平整锐利，背景低，结果更美观可靠。