实验原理/Experimental principle
本产品基于SDS-PAGE电泳中蛋白质在电场作用下按分子量大小分离的基本原理。SDS可与蛋白质结合,使其带上大量负电荷并展开为棒状构象,消除蛋白质原有的电荷差异和形状差异,使电泳迁移率仅取决于分子量大小。本产品以醋酸盐(Acetate)替代传统的甘氨酸作为尾随离子,Tris-Acetate缓冲体系具有更高的离子强度和更优的pH稳定性,可有效减少电泳过程中的产热和条带扭曲,使电泳迁移率仅取决于分子量大小。
技术流程/Procedure
一、配制1×工作液
取适量20×浓缩缓冲液,用去离子水按1:20比例稀释(例如:50 mL浓缩液 + 950 mL去离子水),搅拌均匀即可使用。若浓缩液出现沉淀,可于37℃水浴加热溶解后再行稀释。
二、安装电泳装置
将配制好的1×电泳缓冲液倒入垂直电泳槽的内槽和外槽,内槽缓冲液需完全覆盖加样孔,外槽液面应高于内槽底部电极。确认装置无漏液后,小心拔出凝胶梳子。(注意:Tris-Acetate体系通常阳极和阴极使用相同缓冲液,无需区分)
三、上样
将已变性的蛋白样品及预染Marker加入凝胶加样孔中,根据加样孔容量通常上样10-30 μL。注意避免移液器尖端刺破凝胶或其他加样孔。对于高分子量蛋白样品,建议适当减少上样量以避免条带过载。
四、电泳
盖好电泳槽上盖,连接电泳仪电源。建议电泳条件:恒压150-200V,总电泳时间约30-40分钟。待溴酚蓝指示剂到达凝胶底部时结束电泳。注意:Tris-Acetate体系产热较低,通常无需冰浴,但在高电压下长时间运行仍需监控温度。
五、后续检测
电泳结束后关闭电源,取出凝胶,切除浓缩胶。根据实验目的进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot印迹检测。由于Tris-Acetate体系对高分子量蛋白分离效果优越,特别推荐用于大分子量目标蛋白的Western Blot分析。
产品优势/Highlights
✪ 大蛋白专业分离
专为大分子量蛋白的SDS-PAGE分离设计,有效解决大蛋白在Tris-Glycine体系中聚集、拖尾等问题;
✪ 高倍浓缩
20×浓缩液设计,使用时按1:19比例稀释,单瓶处理量大,经济实用,节省储存空间;
✪ 条带清晰
Hepes体系有效减少离子不均匀现象,蛋白条带平整锐利,背景低,结果更美观可靠。