实验原理/Experimental principle
本产品基于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）中蛋白质在保持天然构象和生物活性的条件下按分子量大小及电荷密度分离的基本原理。与SDS-PAGE不同，非变性体系中不含SDS和还原剂，蛋白质保持其天然构象、亚基组装状态及等电点，电泳迁移率取决于蛋白质的分子量、形状及自身净电荷。本产品采用传统的Tris-Glycine缓冲体系，甘氨酸作为尾随离子，在电泳过程中形成离子迁移梯度，促使天然状态的蛋白质在凝胶中进行分离。
技术流程/Procedure
一、准备缓冲液
本产品为1×即用型配方，无需稀释，可直接使用。若缓冲液出现沉淀，可室温放置或37℃水浴加热溶解后使用。
二、安装电泳装置
将缓冲液倒入垂直电泳槽的内槽和外槽，内槽缓冲液需完全覆盖加样孔，外槽液面应高于内槽底部电极。确认装置无漏液后，小心拔出凝胶梳子。（注意：Tris-Glycine非变性体系阳极和阴极使用相同缓冲液，无需区分）。
三、上样
将制备好的非变性蛋白样品（注意：样品缓冲液中不含SDS和还原剂，且未经加热变性）及Native Marker加入凝胶加样孔中，根据加样孔容量通常上样10-30 μL。注意避免移液器尖端刺破凝胶或其他加样孔。上样前无需加热变性，样品应置于冰上保存。
四、电泳
盖好电泳槽上盖，连接电泳仪电源。建议电泳条件：恒压100-150V（非变性电泳电压不宜过高），将电泳槽置于冰浴中进行，以保持蛋白天然构象和活性。总电泳时间约60-120分钟，待指示染料到达凝胶底部时结束电泳。注意：非变性电泳速度较SDS-PAGE慢，应避免电压过高导致产热和蛋白变性。
五、后续检测
电泳结束后关闭电源，取出凝胶，切除浓缩胶。根据实验目的进行考马斯亮蓝染色（可检测蛋白复合物）、酶活性染色（保持蛋白天然活性）或Western Blot印迹检测。注意：非变性条件下蛋白质的转膜效率可能低于变性条件，建议优化转膜条件。
产品优势/Highlights
✪ 保持天然构象
非变性缓冲体系，不含SDS及还原剂，有效保持蛋白天然构象、酶活性及蛋白复合物完整性；
✪ 高倍浓缩
20×浓缩液设计，使用时按1:19比例稀释，单瓶处理量大，经济实用，节省储存空间；
✪ 经典配方
传统Tris-Glycine非变性电泳体系，文献引用广泛，结果认可度高。