实验原理/Experimental principle
本产品基于SDS-PAGE电泳中蛋白质在电场作用下按分子量大小分离的基本原理。SDS可与蛋白质结合,使其带上大量负电荷并展开为棒状构象,消除蛋白质原有的电荷差异和形状差异,使电泳迁移率仅取决于分子量大小。本产品采用MOPS作为尾随离子,替代传统的甘氨酸,与Bis-Tris凝胶体系中的氯离子形成离子迁移梯度。Bis-Tris凝胶的中性pH环境(pH 7.0)可有效减少蛋白质在碱性条件下的修饰和降解,特别适合用于磷酸化蛋白等翻译后修饰分析。
技术流程/Procedure
一、配制1×工作液
取一包速溶颗粒,倒入洁净的烧杯或量筒中,加入约800 mL去离子水,置于磁力搅拌器上搅拌或手动搅拌至颗粒完全溶解。将溶液转移至容量瓶中,用去离子水补足至1000 mL(1L),轻轻颠倒混匀。若一次不需使用全部工作液,可按比例分装颗粒后配制。
二、安装电泳装置
将配制好的1×电泳缓冲液倒入垂直电泳槽的内槽和外槽,内槽缓冲液需完全覆盖加样孔,外槽液面应高于内槽底部电极。确认装置无漏液后,小心拔出凝胶梳子。(注意:Bis-Tris体系阳极和阴极使用相同缓冲液,无需区分)
三、上样
将已变性的蛋白样品及预染Marker加入凝胶加样孔中,根据加样孔容量通常上样10-30 μL。注意避免移液器尖端刺破凝胶或其他加样孔。使用Bis-Tris凝胶时,建议使用配套的样品缓冲液(中性pH)以获得最佳分离效果。
四、电泳
盖好电泳槽上盖,连接电泳仪电源。建议电泳条件:恒压150-200V,总电泳时间约30-40分钟。待溴酚蓝指示剂到达凝胶底部时结束电泳。注意:Bis-Tris/MOPS体系产热较低,通常无需冰浴,可直接在室温下运行。
五、后续检测
电泳结束后关闭电源,取出凝胶,切除浓缩胶。根据实验目的进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot印迹检测。由于Bis-Tris体系对修饰蛋白的保护作用,特别推荐用于磷酸化蛋白、糖基化蛋白等翻译后修饰的Western Blot分析。
产品优势/Highlights
✪ 速融便捷
即取即用,可快速配制成工作液,无需称量、无需调节pH,省时省力;
✪ 体系优化
专为Bis-Tris凝胶体系设计,MOPS缓冲配方有效维持中性pH环境,蛋白条带锐利、分辨率高;
✪ 稳定可靠
颗粒形式避免液体试剂运输泄漏及长期储存变质问题,批次间稳定性高,结果重复性好。