实验原理/Experimental principle
本产品的电泳原理基于Bis-Tris中性凝胶体系(pH约7.0)配合MOPS缓冲液。在中性pH条件下,可有效避免蛋白质在碱性环境中易发生的烷基化、降解等修饰改变,特别适合磷酸化蛋白、糖基化蛋白等易修饰蛋白的分离。缓冲液中的SDS使蛋白质充分变性和带负电荷,掩盖其自身电荷差异,从而在电泳过程中主要依据分子量大小进行分离。
技术流程/Procedure
取一袋速溶颗粒,加入约800 mL去离子水,搅拌或振荡使颗粒完全溶解,再定容至1 L,混匀即得1× Tris/Tricine/SDS 电泳缓冲液。若需少量配制,可按比例取用颗粒并加水稀释(例如半袋+500 mL水)。若配制后出现沉淀,可于37℃水浴加热溶解后再使用。
将配制好的1×电泳缓冲液倒入垂直电泳槽的内槽和外槽,内槽缓冲液需完全覆盖加样孔,外槽液面应高于内槽底部电极。确认装置无漏液后,小心拔出凝胶板子。(注意:Bis-Tris体系阳极和阴极使用相同缓冲液,无需区分)
将已变性的蛋白样品及预染Marker加入Bis-Tris凝胶加样孔中,根据加样孔容量通常上样10-30 μL。注意避免移液器尖端刺破凝胶或其他加样孔。使用Bis-Tris凝胶时,建议使用配套的中性pH样品缓冲液以获得最佳分离效果。
盖好电泳槽上盖,连接电泳仪电源。建议电泳条件:恒压150-200V,总电泳时间约28-40分钟。待溴酚蓝指示剂到达凝胶底部时结束电泳。
注意:Bis-Tris/Tricine体系产热较低,通常无需冰浴,可直接在室温下运行。
电泳结束后关闭电源,取出凝胶,切除浓缩胶。根据实验目的进行考马斯亮蓝染色、银染或Western Blot印迹检测。由于Bis-Tris体系对修饰蛋白的保护作用,特别推荐用于磷酸化蛋白、糖基化蛋白等翻译后修饰的Western Blot分析。
产品优势/Highlights
✪ 速融便捷
即取即用,可快速配制成工作液,无需称量、无需调节pH,省时省力;
✪ 体系优化
专为小分子量蛋白及多肽的高分辨分离设计,条带清晰锐利,有效解决小肽模糊弥散问题;
✪ 稳定可靠
颗粒形式避免液体试剂运输泄漏及长期储存变质问题,批次间稳定性高,结果重复性好。