实验原理/Experimental principle
本产品基于蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Blue Native PAGE，BN-PAGE）原理，专门用于膜蛋白复合物及超大分子量蛋白复合物（100 kDa–10 MDa）的分离分析。膜蛋白因高度疏水，在常规非变性电泳中难以保持溶解状态；本阴极缓冲液中的考马斯亮蓝G-250可与蛋白质的疏水区域可逆结合，一方面为膜蛋白提供亲水表面使其保持可溶，另一方面为蛋白复合物提供均匀的负电荷，掩盖自身电荷差异，使其在电泳过程中主要依据分子量大小进行分离。
技术流程/Procedure
取适量5×浓缩缓冲液，用去离子水按1:5比例稀释（例如：100 mL浓缩液 + 400 mL去离子水），搅拌均匀即可使用。注意：本缓冲液含考马斯亮蓝G-250，呈蓝色，配制时避免接触衣物及皮肤。
将预制BN-PAGE凝胶或自制梯度凝胶装入垂直电泳槽。阳极槽（下方/内槽）注入配套的阳极缓冲液（不含染料），阴极槽（上方/外槽）注入配制好的1×阴极缓冲液（含染料）。确认装置无漏液，电泳全过程需在4℃冰浴条件下进行，以保护蛋白复合物完整性。
将非变性处理的蛋白样品（含温和去垢剂如洋地黄皂苷或DDM）与配套的BN-PAGE样品缓冲液混合，避免加热变性。小心加入凝胶加样孔中，根据加样孔容量通常上样10-30 μL。同时上样高分子量天然蛋白Marker用于分子量估算。
盖好电泳槽上盖，连接电泳仪电源。建议电泳条件：恒压80-150V，起始电压较低（约80V）待样品进入分离胶后可提高至150V。总电泳时间约1-3小时，根据蛋白复合物大小调整。当蓝色染料前沿到达凝胶底部时结束电泳。
注意：电泳过程中阴极缓冲液中的蓝色会逐渐褪色，属正常现象，必要时可更换新鲜阴极缓冲液。
电泳结束后关闭电源，取出凝胶。考马斯亮蓝G-250结合的复合物可直接观察蓝色条带，也可进行银染、Western Blot或考马斯亮蓝R-250染色。若进行Western Blot，转膜前需用甲醇固定去除结合的考马斯亮蓝，以免影响转膜效率。本体系特别适合线粒体呼吸链复合物、光合系统复合体等膜蛋白复合物的分析。
产品优势/Highlights
✪ 优化非变性设计
专为Native PAGE阴极电泳优化，不含SDS及还原剂，有效保持蛋白天然构象；
✪ 高倍浓缩
5×浓缩液设计，按1:4比例稀释使用，单瓶处理量大，经济实用，节省储存空间；
✪ 适配宽范围分离
特别适用于高分子量蛋白复合物及膜蛋白复合物的非变性电泳，兼容BN-PAGE及CN-PAGE体系。