实验原理/Experimental principle
本试剂盒基于HRP标记的抗体直接检测和增强化学发光(ECL)原理。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是一种由看家基因编码的组成性表达蛋白,在真核细胞中高丰度存在。GAPDH由4个约30-40 kDa的亚基组成,检测条带约36 kDa。由于GAPDH的表达水平在各种生理和病理条件下相对稳定,因此被广泛用作Western Blot实验中的内参(Loading Control),用于校正上样误差和实验体系偏差。
技术流程/Procedure
1.封闭:转膜完成后,加入封闭液,室温摇床封闭5分钟;
2.抗体孵育:弃去封闭液,加入稀释好的Anti-GAPDH-HRP,室温摇床孵育10分钟;
3.洗涤:弃去抗体液,加入Western洗涤液,室温摇床洗涤30秒(重复3次);
4.检测:配制ECL工作液(A液:B液=1:1),覆盖印迹膜孵育0.5分钟,进行化学发光成像。
产品优势/Highlights
✪超快速检测
从完成转膜的印迹膜到获得蛋白条带仅需17分钟(封闭5分钟、抗体孵育10分钟、洗涤1.5分钟、ECL成像0.5分钟),大幅缩短实验周期;
✪ 操作简便
采用HRP直接偶联的Anti-GAPDH抗体,无需二抗孵育和洗涤步骤,简化操作流程;
✪灵敏度高
使用高灵敏度的化学发光试剂,检测灵敏度高,可检测低至纳克级别的GAPDH蛋白。