实验原理/Experimental principle
本试剂盒基于HRP标记的抗体直接检测和增强化学发光(ECL)原理。His标签(通常为6×His,氨基酸序列为HHHHHH)是一种由6个氨基酸组成的小分子标签,是目前分子生物学实验中使用最广泛的小分子标签之一。该抗体经过特殊筛选,仅识别暴露于蛋白C末端的His标签,对N端或内部的His标签无交叉反应。
技术流程/Procedure
1.封闭:转膜完成后,加入封闭液,室温摇床封闭5分钟;
2.抗体孵育:弃去封闭液,加入稀释好的Anti-His Tag-HRP,室温摇床孵育10分钟;
3.洗涤:弃去抗体液,加入Western洗涤液,室温摇床洗涤30秒(重复3次);
4.检测:配制ECL工作液(A液:B液=1:1),覆盖印迹膜孵育0.5分钟,进行化学发光成像。
产品优势/Highlights
✪C端特异性标记
采用C端特异性Anti-His Tag-HRP抗体,仅识别C末端的His标签序列,避免N端标签的交叉干扰;
✪超快速检测
从完成转膜的印迹膜到获得蛋白条带仅需17分钟(封闭5分钟、抗体孵育10分钟、洗涤1.5分钟、ECL成像0.5分钟),大幅缩短实验周期;
✪ 操作简便
采用HRP直接偶联的Anti-His抗体,无需二抗孵育和洗涤步骤,简化操作流程。
✪灵敏度高
使用高灵敏度的化学发光试剂,检测灵敏度高,可检测低至纳克级别的His标签融合蛋白;