实验原理/Experimental principle
本产品基于多种独立作用机制的蛋白酶抑制剂协同抑制原理,通过不同抑制剂分别靶向不同类型的蛋白酶活性位点,全面抑制蛋白提取过程中可能发生的蛋白水解。AEBSF作为丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂,通过与酶活性中心的丝氨酸残基共价结合使其失活;Bestatin通过抑制氨肽酶的活性,防止蛋白质N端的氨基酸被逐个切除;Aprotinin作为竞争性抑制剂,特异性结合丝氨酸蛋白酶的活性位点;Leupeptin同时抑制丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶,通过与酶活性中心的巯基或羟基可逆结合;Pepstatin A抑制天冬氨酸蛋白酶,与酶活性中心的天冬氨酸残基结合;EDTA通过螯合金属离子使金属蛋白酶失活,E-64则特异性共价结合半胱氨酸蛋白酶的活性巯基。
技术流程/Procedure
按1:100的比例将本产品加入预冷的裂解液中(例如:1 mL裂解液加入10 μL本产品),用移液器轻轻吹打或颠倒混匀数次,确保抑制剂均匀分布;将含抑制剂的裂解液立即用于细胞或组织样本的裂解操作。
(注意:添加抑制剂的裂解液建议在30分钟内使用完毕,不宜长期保存)。
产品优势/Highlights
✪ 广谱抑制
广谱抑制丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸及金属蛋白酶,全面保护蛋白完整性;
✪ 高倍浓缩
100×浓缩液设计,单瓶处理量大,微量添加即可满足需求,经济实用,减少储存空间;
✪ 兼容性强
哺乳动物细胞/组织裂解体系兼容性好,不影响下游实验。