实验原理/Experimental principle
本产品基于差速离心原理，利用组织匀浆后不同细胞组分在离心力场中沉降系数的差异实现线粒体的分离富集。首先使用预冷分离缓冲液配合机械匀浆（如玻璃匀浆器或电动匀浆器）破碎动物组织，在等渗条件下释放线粒体、细胞核、细胞碎片等亚细胞结构，同时保持线粒体结构和功能的完整性；随后通过低速离心去除未破碎组织、细胞核及大颗粒碎片，上清中含有线粒体、溶酶体、过氧化物酶体等组分；最后通过中速离心富集线粒体沉淀，上清为胞浆组分。提取的线粒体蛋白建议使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK001/BQK003）。
技术流程/Procedure
一、组织准备
取新鲜动物组织（推荐50-200 mg，如肝、肾、心、脑、肌肉等），用预冷PBS或生理盐水洗净血污。将组织剪成细小碎片（约1 mm³大小），置于冰上备用。
二、试剂准备
将线粒体分离缓冲液从-20°C取出，冰上解冻，预冷备用。临用前向分离缓冲液中加入蛋白酶抑制剂（如PMSF，终浓度1 mM），混匀备用。
三、组织匀浆
将组织碎片转移至预冷匀浆器中，按每100 mg组织加入500-1000 μL分离缓冲液的比例加入预冷分离缓冲液。冰上匀浆20-40次（玻璃匀浆器）或使用电动匀浆器低速匀浆（每次5-10秒，间隔30秒，重复2-3次）。镜检观察：约80-90%细胞破碎、细胞核游离但保持完整为最佳。（注意：避免过度匀浆，以免线粒体破裂；匀浆全程保持低温。）
四、差速离心分离线粒体
将匀浆液转移至预冷离心管中，4°C、600-1,000 × g离心5-10分钟，去除未破碎组织、细胞核及大颗粒碎片。小心吸取上清（含线粒体），转移至新的预冷离心管中，避免触及沉淀。4°C、6,000-12,000 × g离心10-20分钟，富集线粒体。弃上清，保留沉淀（线粒体），上清为胞浆组分（可保留用于下游分析）。
五、线粒体洗涤（可选，推荐）
加入适量预冷分离缓冲液（约500 μL）轻轻重悬线粒体沉淀。4°C、6,000-12,000 × g离心10-15分钟，弃上清。
六、线粒体裂解（如需提取线粒体蛋白）
向线粒体沉淀中加入RIPA裂解液或线粒体专用裂解液（每50 mg组织来源的线粒体加入50-100 μL）。冰上裂解20-30分钟，期间轻轻振荡。4°C、12,000 × g离心10分钟，取上清即为线粒体蛋白。
七、定量与保存
使用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。分装后置于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。
产品优势/Highlights
✪ 分离清晰
针对组织样本优化设计，有效去除细胞碎片及核蛋白污染，获得高纯度完整线粒体；
✪ 保护天然构象
有效保持线粒体膜完整性、膜电位及呼吸链酶活性，适用于功能研究；
✪ 操作便捷
常规低温离心机即可，约1.5小时内获得活性线粒体。