实验原理/Experimental principle
本产品基于低渗膨胀与去污剂处理及高盐提取相结合的原理：首先使用低渗的浆蛋白提取试剂处理细胞，使细胞在低渗条件下吸水膨胀，细胞膜通透性增加，配合温和去污剂选择性破坏细胞膜但不破坏核膜，释放胞浆蛋白，离心后上清即为浆蛋白提取液，沉淀为完整的细胞核；随后使用含高浓度盐的核蛋白提取试剂处理沉淀，高盐条件可破坏核膜结构并解离核内蛋白与DNA的结合，释放核蛋白，离心后上清即为核蛋白提取液。提取的蛋白样品建议使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK001/BQK003）。
技术流程/Procedure
一、细胞准备
收集贴壁细胞或悬浮细胞（推荐1-5×10⁷个细胞），4°C、500 × g离心5-10分钟，弃上清。用预冷PBS洗涤细胞1-2次，离心后弃上清，尽量吸尽残留液体。
二、试剂准备
将浆蛋白提取试剂和核蛋白提取试剂从-20°C取出，冰上解冻。临用前向两种试剂中加入蛋白酶抑制剂（如PMSF，终浓度1 mM），混匀备用。
三、提取浆蛋白
按每20 μL细胞沉淀加入200 μL浆蛋白提取试剂的比例，加入浆蛋白提取试剂。轻轻吹打重悬，冰上孵育10-15分钟，期间可轻轻颠倒混匀2-3次。4°C、12,000-14,000 × g离心10-15分钟。小心吸取上清（浆蛋白组分），转移至新的预冷EP管中，置于冰上备用。保留沉淀（细胞核），用于后续核蛋白提取。
四、提取核蛋白
按每20 μL原始细胞沉淀加入100-200 μL核蛋白提取试剂的比例，向沉淀中加入核蛋白提取试剂。剧烈涡旋重悬（使沉淀完全分散），冰上孵育20-30分钟，期间每5-10分钟涡旋一次。4°C、12,000-14,000 × g离心10-15分钟。小心吸取上清（核蛋白组分），转移至新的预冷EP管中。
五、定量与保存
使用BCA蛋白定量试剂盒分别测定浆蛋白和核蛋白浓度。分装后置于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。
产品优势/Highlights
✪分离清晰
采用选择性细胞裂解与核分离技术，有效分离细胞核蛋白与细胞浆蛋白，亚细胞定位结果可靠；
✪ 保护天然构象
温和抽提体系配合蛋白酶抑制剂，全程保护蛋白天然构象；
✪ 即用便捷
常规台式离心机即可，约1.5小时内获得高纯度核蛋白和浆蛋白组分，适合高通量处理。