实验原理/Experimental principle
本产品基于表面活性剂梯度分相原理，利用不同浓度去污剂对细胞膜结构的选择性破坏作用实现浆蛋白与膜蛋白的分离。首先使用低浓度去污剂的试剂A处理细胞，在不破坏细胞核及细胞器膜的前提下选择性破坏细胞膜，释放胞浆蛋白，离心后上清即为浆蛋白提取液，沉淀富含细胞膜及细胞器膜；随后使用含高浓度去污剂的试剂B处理沉淀，高浓度去污剂能够充分溶解膜整合蛋白及膜结合蛋白，离心后上清即为膜蛋白提取液。提取的蛋白样品建议使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK001/BQK003）。
技术流程/Procedure
一、细胞准备
收集贴壁细胞或悬浮细胞，4°C、500 × g离心5-10分钟，弃上清。用预冷PBS洗涤细胞1-2次，离心后弃上清，尽量吸尽残留液体。记录细胞湿重或细胞数量（推荐每次提取1-5×10⁷个细胞）。
二、试剂准备
将试剂A和试剂B从-20°C取出，冰上解冻。临用前向试剂A和试剂B中加入蛋白酶抑制剂（如PMSF，终浓度1 mM），混匀备用。
三、提取浆蛋白
按每20 μL细胞沉淀加入200 μL试剂A的比例，向细胞沉淀中加入试剂A。轻轻吹打重悬，冰上孵育10-15分钟，期间可轻轻颠倒混匀2-3次。4°C、12,000-14,000 × g离心10-15分钟。小心吸取上清（浆蛋白组分），转移至新的预冷EP管中，置于冰上备用。保留沉淀（富含细胞膜及细胞器膜），用于后续膜蛋白提取。
四、提取膜蛋白
按每20 μL原始细胞沉淀加入200 μL试剂B的比例，向上述沉淀中加入试剂B。剧烈涡旋重悬（使沉淀完全分散），冰上孵育20-30分钟，期间每5-10分钟涡旋一次。4°C、12,000-14,000 × g离心10-15分钟。小心吸取上清（膜蛋白组分），转移至新的预冷EP管中。
五、定量与保存
使用Bradford 蛋白定量试剂盒或BCA蛋白定量试剂盒（货号：BQK001/BQK003）分别测定浆蛋白和膜蛋白浓度。分装后置于-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。
产品优势/Highlights
✪ 分离清晰
采用选择性提取技术，高效分离细胞膜蛋白与胞浆蛋白，交叉污染低，亚细胞定位结果可靠；
✪ 保持活性
温和去污剂配方配合蛋白酶抑制剂，全程保护蛋白天然构象；
✪ 操作简便
常规台式离心机即可，1小时内获得高纯度膜蛋白和浆蛋白组分，适合高通量样本处理。