实验原理/Experimental principle
抗体与抗原之间的结合主要依赖疏水作用、氢键及静电引力。在低pH(酸性)条件下,蛋白质分子的侧链基团质子化,导致抗体和抗原的电荷状态及空间构象发生改变,从而破坏两者间的非共价结合力,使抗体从膜上解离下来。同时,缓冲液中的去污剂和还原剂可进一步促进抗体的洗脱。由于本产品不含有破坏蛋白质结构的变性剂(如SDS)或强还原剂(如β-巯基乙醇),剥离后的膜上抗原蛋白保持完整,可重新进行封闭和一抗孵育。通常在室温下振荡5-15分钟即可完成剥离,之后用TBST洗涤即可进行下一轮检测,实现多轮Western Blot实验。
技术流程/Procedure
1. 完成ECL发光检测后,用TBST洗膜 5 min;
2. 加入适量本产品覆盖膜表面(以膜可轻轻上浮为宜),在摇床上漂洗10 min;
注意:剥离时间视膜上抗体结合量的多少而定,如抗体结合较强或结合时间较长,可适当延长剥离时间至15~20 min。
3. 倒掉剥离液,加入 TBST漂洗膜 5 min。此时可在膜上滴上ECL发光液以快速检验抗体剥离效果;用合适的封闭液重新封闭膜,即可再次杂交其它抗体;
4. 使用本剥离液,膜可进行至少10次以上剥离而不会显著影响信号强度。
产品优势/Highlights
✪ 高效省时
不需重新制胶电泳,同一张膜的相同样品可用于多种检测;仅需10 min即可完成剥离;
✪ 配方温和
对转印膜上结合的靶蛋白损伤极微;
✪ 环保无毒
本品使用环保配方,无毒,无刺激性气味。